细菌基因组完成图真菌基因组完成图微生物群落多样性宏基因组测序服务全长转录组测序第三代测序服务非靶向代谢组学靶向代谢组学脂质组学离子组学脂肪酸检测氨基酸检测代谢组学服务定量蛋白质组服务双向电泳服务修饰蛋白质组蛋白质芯片蛋白质谱鉴定蛋白互作检测Western Blot蛋白质组学服务高通量测序数据分析蛋白质组学数据分析代谢组学数据分析芯片数据分析GO/Pathway富集分析相关性和聚类分析共表达网络图靶基因预测调控网络图蛋白相互作用网络图生物信息学服务CRISPR/Cas9载体构建稳定细胞系构建服务模式生物制备服务CRISPR/Cas9技术服务甲基化测序服务甲基化芯片服务甲基化验证服务DNA甲基化服务lncRNA测序服务lncRNA芯片服务lncRNA定量PCR验证lncRNA过表达服务lncRNA抑制服务lncRNA技术服务miRNA测序服务miRNA芯片服务miRNA定量PCR验证miRNA过表达服务miRNA抑制服务miRNA靶基因验证服务miRNA技术服务环状RNA测序服务环状RNA芯片服务环状RNA定量PCR验证环状RNA过表达服务环状RNA抑制服务环状RNA技术服务转录组测序服务表达谱测序服务mRNA/lncRNA/环状RNA 三合一芯片表达谱芯片服务荧光定量PCR验证mRNA过表达服务mRNA抑制服务mRNA技术服务转录因子筛选服务抗体制备服务ChiP-Seq测序服务ChiP-qPCR技术服务EMSA技术服务luciferase 实验服务转录因子技术服务mRNA定量PCR检测miRNA定量PCR检测lncRNA定量PCR检测环状RNA定量PCR检测DNA拷贝数检测相对定量PCR服务绝对定量PCR服务荧光定量PCR服务整体课题服务SNP分型检测服务SSR/STR技术服务病毒包装服务CRISPR/Cas9技术试剂miRNA功能研究试剂lncRNA功能研究试剂环状RNA功能研究试剂mRNA功能研究试剂发表文献样品准备服务流程基金申请
环状RNA过表达服务
服务详情

  利用环状RNA(circRNA)测序和芯片技术筛选到差异表达的circRNA后,往往需要开展gain-of-function(功能获得)研究,就需要过表达circRNA。

     circRNA过表达思想主要源于circRNA生物形成机制,已有多篇文章报道circRNA成环机制,目前比较公认的成环机制为circRNA侧翼序列的碱基互补配对,称之为Alu结构(如下图)。


                                                        circRNA侧翼结构特征


      基于circRNA侧翼Alu序列特征,PCR扩增含侧翼Alu序列的目标DNA序列,随后依据对应限制性内切酶位点进行酶切,进而连接pEGFP-C1载体。连接载体进而转染对应细胞样本,定量PCR检测转染效率?;赿ivergent primer验证circRNA过表达倍数。


    过表达策略:

    1. 扩增目标区域包含circRNA侧翼Alu序列或内部碱基互补序列,侧翼上下游1kb处过表达效率更佳;

    2. 目标区域扩增基于基因组DNA为模版。

      环状RNA(circRNA)由于结构的特殊性,与miroRNA和lncRNA有着很大差异,让研究者对于它的功能的研究也是难于开展。我们经过不断设计、验证和优化,先后测试了20多种环状RNA表达框架,优化出了特异性准确过表达环状RNA分子的载体。载体含有表达环状RNA的表达框,可以在细胞内通过RNA剪接形成环状的RNA分子;广大研究者可以将目标环状RNA的线性序列PCR扩增出来,直接连接到载体上生成对应环状RNA。


    实验流程:

      

      客户只需提供环状RNA的名称及其环化位点。言行生物将构建circRNA表达载体,进行慢病毒或腺病毒包装,感染目标细胞或者动物,提供稳定转染的细胞或动物。