細菌基因組完成圖真菌基因組完成圖微生物群落多樣性宏基因組測序服務全長轉錄組測序第三代測序服務非靶向代謝組學靶向代謝組學脂質組學離子組學脂肪酸檢測氨基酸檢測代謝組學服務定量蛋白質組服務雙向電泳服務修飾蛋白質組蛋白質芯片蛋白質譜鑒定蛋白互作檢測Western Blot蛋白質組學服務高通量測序數據分析蛋白質組學數據分析代謝組學數據分析芯片數據分析GO/Pathway富集分析相關性和聚類分析共表達網絡圖靶基因預測調控網絡圖蛋白相互作用網絡圖生物信息學服務CRISPR/Cas9載體構建穩定細胞系構建服務模式生物制備服務CRISPR/Cas9技術服務甲基化測序服務甲基化芯片服務甲基化驗證服務DNA甲基化服務lncRNA測序服務lncRNA芯片服務lncRNA定量PCR驗證lncRNA過表達服務lncRNA抑制服務lncRNA技術服務miRNA測序服務miRNA芯片服務miRNA定量PCR驗證miRNA過表達服務miRNA抑制服務miRNA靶基因驗證服務miRNA技術服務環狀RNA測序服務環狀RNA芯片服務環狀RNA定量PCR驗證環狀RNA過表達服務環狀RNA抑制服務環狀RNA技術服務轉錄組測序服務表達譜測序服務mRNA/lncRNA/環狀RNA 三合一芯片表達譜芯片服務熒光定量PCR驗證mRNA過表達服務mRNA抑制服務mRNA技術服務轉錄因子篩選服務抗體制備服務ChiP-Seq測序服務ChiP-qPCR技術服務EMSA技術服務luciferase 實驗服務轉錄因子技術服務mRNA定量PCR檢測miRNA定量PCR檢測lncRNA定量PCR檢測環狀RNA定量PCR檢測DNA拷貝數檢測相對定量PCR服務絕對定量PCR服務熒光定量PCR服務整體課題服務SNP分型檢測服務SSR/STR技術服務病毒包裝服務CRISPR/Cas9技術試劑miRNA功能研究試劑lncRNA功能研究試劑環狀RNA功能研究試劑mRNA功能研究試劑發表文獻樣品準備服務流程基金申請
環狀RNA過表達服務
服務詳情

  利用環狀RNA(circRNA)測序和芯片技術篩選到差異表達的circRNA后,往往需要開展gain-of-function(功能獲得)研究,就需要過表達circRNA。

     circRNA過表達思想主要源于circRNA生物形成機制,已有多篇文章報道circRNA成環機制,目前比較公認的成環機制為circRNA側翼序列的堿基互補配對,稱之為Alu結構(如下圖)。


                                                        circRNA側翼結構特征


      基于circRNA側翼Alu序列特征,PCR擴增含側翼Alu序列的目標DNA序列,隨后依據對應限制性內切酶位點進行酶切,進而連接pEGFP-C1載體。連接載體進而轉染對應細胞樣本,定量PCR檢測轉染效率?;赿ivergent primer驗證circRNA過表達倍數。


    過表達策略:

    1. 擴增目標區域包含circRNA側翼Alu序列或內部堿基互補序列,側翼上下游1kb處過表達效率更佳;

    2. 目標區域擴增基于基因組DNA為模版。

      環狀RNA(circRNA)由于結構的特殊性,與miroRNA和lncRNA有著很大差異,讓研究者對于它的功能的研究也是難于開展。我們經過不斷設計、驗證和優化,先后測試了20多種環狀RNA表達框架,優化出了特異性準確過表達環狀RNA分子的載體。載體含有表達環狀RNA的表達框,可以在細胞內通過RNA剪接形成環狀的RNA分子;廣大研究者可以將目標環狀RNA的線性序列PCR擴增出來,直接連接到載體上生成對應環狀RNA。


    實驗流程:

      

      客戶只需提供環狀RNA的名稱及其環化位點。言行生物將構建circRNA表達載體,進行慢病毒或腺病毒包裝,感染目標細胞或者動物,提供穩定轉染的細胞或動物。