细菌基因组完成图真菌基因组完成图微生物群落多样性宏基因组测序服务全长转录组测序第三代测序服务非靶向代谢组学靶向代谢组学脂质组学离子组学脂肪酸检测氨基酸检测代谢组学服务定量蛋白质组服务双向电泳服务修饰蛋白质组蛋白质芯片蛋白质谱鉴定蛋白互作检测Western Blot蛋白质组学服务高通量测序数据分析蛋白质组学数据分析代谢组学数据分析芯片数据分析GO/Pathway富集分析相关性和聚类分析共表达网络图靶基因预测调控网络图蛋白相互作用网络图生物信息学服务CRISPR/Cas9载体构建稳定细胞系构建服务模式生物制备服务CRISPR/Cas9技术服务甲基化测序服务甲基化芯片服务甲基化验证服务DNA甲基化服务lncRNA测序服务lncRNA芯片服务lncRNA定量PCR验证lncRNA过表达服务lncRNA抑制服务lncRNA技术服务miRNA测序服务miRNA芯片服务miRNA定量PCR验证miRNA过表达服务miRNA抑制服务miRNA靶基因验证服务miRNA技术服务环状RNA测序服务环状RNA芯片服务环状RNA定量PCR验证环状RNA过表达服务环状RNA抑制服务环状RNA技术服务转录组测序服务表达谱测序服务mRNA/lncRNA/环状RNA 三合一芯片表达谱芯片服务荧光定量PCR验证mRNA过表达服务mRNA抑制服务mRNA技术服务转录因子筛选服务抗体制备服务ChiP-Seq测序服务ChiP-qPCR技术服务EMSA技术服务luciferase 实验服务转录因子技术服务mRNA定量PCR检测miRNA定量PCR检测lncRNA定量PCR检测环状RNA定量PCR检测DNA拷贝数检测相对定量PCR服务绝对定量PCR服务荧光定量PCR服务整体课题服务SNP分型检测服务SSR/STR技术服务病毒包装服务CRISPR/Cas9技术试剂miRNA功能研究试剂lncRNA功能研究试剂环状RNA功能研究试剂mRNA功能研究试剂发表文献样品准备服务流程基金申请
环状RNA定量PCR验证
服务详情

简介

  

  环状RNA(circRNA)是一类特殊的非编码RNA分子,也是RNA领域最新的研究热点。环状RNA是mRNA在剪接的过程中,上游exon的5’端与下游exon的3’端剪接到一起,从而形成的首尾相接的环状RNA分子,大量存在于真核转录组中,在不同的物种中具有保守性,同时存在组织及不同发育阶段的表达特异性。目前已经发现的环状RNA已多达十万种。

  环状RNA(circRNA)Real time PCR检测常用于验证circRNA 测序和circRNA芯片的差异结果。

一、技术原理

     circRNA定量验证手段与常规PCR手段不同,常规手段是围绕目的片段的上下游分别设计PCR引物,称之为convergent primer,需扩增的片段位于上下游引物之间。而对于circRNA,尤其外显子环化circRNA,除backsplice junction位点处不同于linear RNA之外,body区与linearRNA是一致的。因此,验证时需要特异性针对backsplice junction位点处设计primer,称之为divergent primer,而且设计的PCR 产物的长度越短越好,可以增强环化位点处扩增效率。如下图:


  

  为增强circRNA的验证效率,起始模版需满足以下要求(3 free):1. DNA free;2. rRNA free;3. linearRNA free。

  验证策略:对3free RNA以及genome DNA同时进行PCR扩增,电泳检测PCR产物大小。


  二、服务内容

          (1)引物设计及引物合成;

          (2)RNA抽提;

          (3)进行逆转录;

          (4)荧光定量PCR检测各个样品circRNA的表达量。

    客户提供

          (1)circRNA的名称或者登录号;

          (2)总RNA≥8ug),或提供满足提取8ug以上RNA的组织、细胞、血液等样品。

    我们提供

         (1)引物序列;

         (2)完整的实验报告(扩增曲线、溶解曲线、实验步骤);

         (3)结果分析报告。


    三、结果展示

    1、PCR产物检测3free RNA及genome DNA同时进行PCR扩增)



    2、扩增曲线

              

    3、溶解曲线

    4、分析结果