細菌基因組完成圖真菌基因組完成圖微生物群落多樣性宏基因組測序服務全長轉錄組測序第三代測序服務非靶向代謝組學靶向代謝組學脂質組學離子組學脂肪酸檢測氨基酸檢測代謝組學服務定量蛋白質組服務雙向電泳服務修飾蛋白質組蛋白質芯片蛋白質譜鑒定蛋白互作檢測Western Blot蛋白質組學服務高通量測序數據分析蛋白質組學數據分析代謝組學數據分析芯片數據分析GO/Pathway富集分析相關性和聚類分析共表達網絡圖靶基因預測調控網絡圖蛋白相互作用網絡圖生物信息學服務CRISPR/Cas9載體構建穩定細胞系構建服務模式生物制備服務CRISPR/Cas9技術服務甲基化測序服務甲基化芯片服務甲基化驗證服務DNA甲基化服務lncRNA測序服務lncRNA芯片服務lncRNA定量PCR驗證lncRNA過表達服務lncRNA抑制服務lncRNA技術服務miRNA測序服務miRNA芯片服務miRNA定量PCR驗證miRNA過表達服務miRNA抑制服務miRNA靶基因驗證服務miRNA技術服務環狀RNA測序服務環狀RNA芯片服務環狀RNA定量PCR驗證環狀RNA過表達服務環狀RNA抑制服務環狀RNA技術服務轉錄組測序服務表達譜測序服務mRNA/lncRNA/環狀RNA 三合一芯片表達譜芯片服務熒光定量PCR驗證mRNA過表達服務mRNA抑制服務mRNA技術服務轉錄因子篩選服務抗體制備服務ChiP-Seq測序服務ChiP-qPCR技術服務EMSA技術服務luciferase 實驗服務轉錄因子技術服務mRNA定量PCR檢測miRNA定量PCR檢測lncRNA定量PCR檢測環狀RNA定量PCR檢測DNA拷貝數檢測相對定量PCR服務絕對定量PCR服務熒光定量PCR服務整體課題服務SNP分型檢測服務SSR/STR技術服務病毒包裝服務CRISPR/Cas9技術試劑miRNA功能研究試劑lncRNA功能研究試劑環狀RNA功能研究試劑mRNA功能研究試劑發表文獻樣品準備服務流程基金申請
環狀RNA定量PCR驗證
服務詳情

簡介

  

  環狀RNA(circRNA)是一類特殊的非編碼RNA分子,也是RNA領域最新的研究熱點。環狀RNA是mRNA在剪接的過程中,上游exon的5’端與下游exon的3’端剪接到一起,從而形成的首尾相接的環狀RNA分子,大量存在于真核轉錄組中,在不同的物種中具有保守性,同時存在組織及不同發育階段的表達特異性。目前已經發現的環狀RNA已多達十萬種。

  環狀RNA(circRNA)Real time PCR檢測常用于驗證circRNA 測序和circRNA芯片的差異結果。

一、技術原理

     circRNA定量驗證手段與常規PCR手段不同,常規手段是圍繞目的片段的上下游分別設計PCR引物,稱之為convergent primer,需擴增的片段位于上下游引物之間。而對于circRNA,尤其外顯子環化circRNA,除backsplice junction位點處不同于linear RNA之外,body區與linearRNA是一致的。因此,驗證時需要特異性針對backsplice junction位點處設計primer,稱之為divergent primer,而且設計的PCR 產物的長度越短越好,可以增強環化位點處擴增效率。如下圖:


  

  為增強circRNA的驗證效率,起始模版需滿足以下要求(3 free):1. DNA free;2. rRNA free;3. linearRNA free。

  驗證策略:對3free RNA以及genome DNA同時進行PCR擴增,電泳檢測PCR產物大小。


  二、服務內容

          (1)引物設計及引物合成;

          (2)RNA抽提;

          (3)進行逆轉錄;

          (4)熒光定量PCR檢測各個樣品circRNA的表達量。

    客戶提供

          (1)circRNA的名稱或者登錄號;

          (2)總RNA≥8ug),或提供滿足提取8ug以上RNA的組織、細胞、血液等樣品。

    我們提供

         (1)引物序列;

         (2)完整的實驗報告(擴增曲線、溶解曲線、實驗步驟);

         (3)結果分析報告。


    三、結果展示

    1、PCR產物檢測3free RNA及genome DNA同時進行PCR擴增)



    2、擴增曲線

              

    3、溶解曲線

    4、分析結果