細菌基因組完成圖真菌基因組完成圖微生物群落多樣性宏基因組測序服務全長轉錄組測序第三代測序服務非靶向代謝組學靶向代謝組學脂質組學離子組學脂肪酸檢測氨基酸檢測代謝組學服務定量蛋白質組服務雙向電泳服務修飾蛋白質組蛋白質芯片蛋白質譜鑒定蛋白互作檢測Western Blot蛋白質組學服務高通量測序數據分析蛋白質組學數據分析代謝組學數據分析芯片數據分析GO/Pathway富集分析相關性和聚類分析共表達網絡圖靶基因預測調控網絡圖蛋白相互作用網絡圖生物信息學服務CRISPR/Cas9載體構建穩定細胞系構建服務模式生物制備服務CRISPR/Cas9技術服務甲基化測序服務甲基化芯片服務甲基化驗證服務DNA甲基化服務lncRNA測序服務lncRNA芯片服務lncRNA定量PCR驗證lncRNA過表達服務lncRNA抑制服務lncRNA技術服務miRNA測序服務miRNA芯片服務miRNA定量PCR驗證miRNA過表達服務miRNA抑制服務miRNA靶基因驗證服務miRNA技術服務環狀RNA測序服務環狀RNA芯片服務環狀RNA定量PCR驗證環狀RNA過表達服務環狀RNA抑制服務環狀RNA技術服務轉錄組測序服務表達譜測序服務mRNA/lncRNA/環狀RNA 三合一芯片表達譜芯片服務熒光定量PCR驗證mRNA過表達服務mRNA抑制服務mRNA技術服務轉錄因子篩選服務抗體制備服務ChiP-Seq測序服務ChiP-qPCR技術服務EMSA技術服務luciferase 實驗服務轉錄因子技術服務mRNA定量PCR檢測miRNA定量PCR檢測lncRNA定量PCR檢測環狀RNA定量PCR檢測DNA拷貝數檢測相對定量PCR服務絕對定量PCR服務熒光定量PCR服務整體課題服務SNP分型檢測服務SSR/STR技術服務病毒包裝服務CRISPR/Cas9技術試劑miRNA功能研究試劑lncRNA功能研究試劑環狀RNA功能研究試劑mRNA功能研究試劑發表文獻樣品準備服務流程基金申請
甲基化檢測服務
服務詳情


簡介

  利用甲基化測序和甲基化芯片技術得到的差異甲基化基因,或者經過參考文獻而感興趣的甲基化基因,都需要進行DNA甲基化驗證。言行生物能提供美國Sequenom公司的MassARRAY質譜技術、MSP技術、BSP技術等進行甲基化檢測服務。

一、Sequenom MassARRAY技術服務

實驗流程和原理

  • 將待測DNA經過亞硫酸鹽處理,DNA中未甲基化胞嘧啶(C)轉變為尿嘧啶(U),而甲基化修飾的胞嘧啶不變;
  • 通過PCR擴增過程引入T7-啟動子序列,經T7 DNA聚合酶的體外轉錄過程得到各樣本RNA產物;
  • 經過堿基特異性酶切處理,得到RNA小片段,并用飛行質譜檢測每個片段的分子量,最后EpiTYPER程序完成數據的自動化處理并報告每個檢測片段的甲基化程度。

  • 在步驟3的體系中,利用Rnase A能夠特異性識別并切割RNAU3端的特性,將RNA片段切割成帶有CpG位點的小片段。

  • 使用MassArray飛行質譜系統檢測產物。由于同一片段中,只有CpGCpA之間16Da的分子量差別,即質譜圖中兩者峰的差距。


  • 特點

    1、定量檢測覆蓋長達600bp 的所有CpG 位點;

    2、精度高(5%CV),靈敏度高(可檢測低至5% 的甲基化水平);

    3、無需后續驗證,可直接發表結果;

    4、研究幾個到幾百個甲基化位點的理想手段


    結果展示

    1、甲基化程度展示圖


    2、甲基化程度定量結果


    樣品量

    細胞樣品請提供至少2×107個細胞,組織樣品請提供至少50mg的組織塊或切片,DNA樣品請提供5 μg以上。


    二、MSP技術服務

      原理:甲基化特異性的PCR技術methylation-specific PCR, MSP)是在亞硫酸鹽處理基因組DNA后,所有未發生甲基化的胞嘧啶(C)被轉化為尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶則不變,設計兩對引物,即一對擴增甲基化DNA鏈(引物對M),另一對擴增非甲基化DNA鏈(引物對U),電泳檢測引物MU是否擴增成功,來判斷某個基因的甲基化情況。

      客戶只需提供待測基因和≥2ug的基因組DNA或其他足量的樣品。我們進行基因組DNA處理,MSP引物設計合成,PCR擴增,分析結果等,提供實驗報告(包括MSP擴增圖)。

    結果展示



    、BSP技術服務

      原理:BSPBisulfite Genomic Sequence)技術是在亞硫酸鹽處理基因組DNA后,所有未發生甲基化的胞嘧啶(C)被轉化為尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶則不變,設計BSP引物擴增,此時尿嘧啶(U)全部轉化為胸腺嘧啶(T),PCR產物進行克隆,再挑克隆測序看結果是CG還是TG從而判斷該位點是否發生甲基化。

      客戶只需提供待測基因和≥2ug的基因組DNA或其他足量的樣品。我們進行基因組DNA處理,BSP引物設計合成,PCR擴增,將產物克隆測序,分析結果等,提供實驗報告(包括BSP產物的測序報告)。

    結果展示---序列比對