细菌基因组完成图真菌基因组完成图微生物群落多样性宏基因组测序服务全长转录组测序第三代测序服务非靶向代谢组学靶向代谢组学脂质组学离子组学脂肪酸检测氨基酸检测代谢组学服务定量蛋白质组服务双向电泳服务修饰蛋白质组蛋白质芯片蛋白质谱鉴定蛋白互作检测Western Blot蛋白质组学服务高通量测序数据分析蛋白质组学数据分析代谢组学数据分析芯片数据分析GO/Pathway富集分析相关性和聚类分析共表达网络图靶基因预测调控网络图蛋白相互作用网络图生物信息学服务CRISPR/Cas9载体构建稳定细胞系构建服务模式生物制备服务CRISPR/Cas9技术服务甲基化测序服务甲基化芯片服务甲基化验证服务DNA甲基化服务lncRNA测序服务lncRNA芯片服务lncRNA定量PCR验证lncRNA过表达服务lncRNA抑制服务lncRNA技术服务miRNA测序服务miRNA芯片服务miRNA定量PCR验证miRNA过表达服务miRNA抑制服务miRNA靶基因验证服务miRNA技术服务环状RNA测序服务环状RNA芯片服务环状RNA定量PCR验证环状RNA过表达服务环状RNA抑制服务环状RNA技术服务转录组测序服务表达谱测序服务mRNA/lncRNA/环状RNA 三合一芯片表达谱芯片服务荧光定量PCR验证mRNA过表达服务mRNA抑制服务mRNA技术服务转录因子筛选服务抗体制备服务ChiP-Seq测序服务ChiP-qPCR技术服务EMSA技术服务luciferase 实验服务转录因子技术服务mRNA定量PCR检测miRNA定量PCR检测lncRNA定量PCR检测环状RNA定量PCR检测DNA拷贝数检测相对定量PCR服务绝对定量PCR服务荧光定量PCR服务整体课题服务SNP分型检测服务SSR/STR技术服务病毒包装服务CRISPR/Cas9技术试剂miRNA功能研究试剂lncRNA功能研究试剂环状RNA功能研究试剂mRNA功能研究试剂发表文献样品准备服务流程基金申请
甲基化检测服务
服务详情


简介

  利用甲基化测序和甲基化芯片技术得到的差异甲基化基因,或者经过参考文献而感兴趣的甲基化基因,都需要进行DNA甲基化验证。言行生物能提供美国Sequenom公司的MassARRAY质谱技术、MSP技术、BSP技术等进行甲基化检测服务。

一、Sequenom MassARRAY技术服务

实验流程和原理

  • 将待测DNA经过亚硫酸盐处理,DNA中未甲基化胞嘧啶(C)转变为尿嘧啶(U),而甲基化修饰的胞嘧啶不变;
  • 通过PCR扩增过程引入T7-启动子序列,经T7 DNA聚合酶的体外转录过程得到各样本RNA产物;
  • 经过碱基特异性酶切处理,得到RNA小片段,并用飞行质谱检测每个片段的分子量,最后EpiTYPER程序完成数据的自动化处理并报告每个检测片段的甲基化程度。

  • 在步骤3的体系中,利用Rnase A能够特异性识别并切割RNAU3端的特性,将RNA片段切割成带有CpG位点的小片段。

  • 使用MassArray飞行质谱系统检测产物。由于同一片段中,只有CpGCpA之间16Da的分子量差别,即质谱图中两者峰的差距。


  • 特点

    1、定量检测覆盖长达600bp 的所有CpG 位点;

    2、精度高(5%CV),灵敏度高(可检测低至5% 的甲基化水平);

    3、无需后续验证,可直接发表结果;

    4、研究几个到几百个甲基化位点的理想手段


    结果展示

    1、甲基化程度展示图


    2、甲基化程度定量结果


    样品量

    细胞样品请提供至少2×107个细胞,组织样品请提供至少50mg的组织块或切片,DNA样品请提供5 μg以上。


    二、MSP技术服务

      原理:甲基化特异性的PCR技术methylation-specific PCR, MSP)是在亚硫酸盐处理基因组DNA后,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变,设计两对引物,即一对扩增甲基化DNA链(引物对M),另一对扩增非甲基化DNA链(引物对U),电泳检测引物MU是否扩增成功,来判断某个基因的甲基化情况。

      客户只需提供待测基因和≥2ug的基因组DNA或其他足量的样品。我们进行基因组DNA处理,MSP引物设计合成,PCR扩增,分析结果等,提供实验报告(包括MSP扩增图)。

    结果展示



    、BSP技术服务

      原理:BSPBisulfite Genomic Sequence)技术是在亚硫酸盐处理基因组DNA后,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变,设计BSP引物扩增,此时尿嘧啶(U)全部转化为胸腺嘧啶(T),PCR产物进行克隆,再挑克隆测序看结果是CG还是TG从而判断该位点是否发生甲基化。

      客户只需提供待测基因和≥2ug的基因组DNA或其他足量的样品。我们进行基因组DNA处理,BSP引物设计合成,PCR扩增,将产物克隆测序,分析结果等,提供实验报告(包括BSP产物的测序报告)。

    结果展示---序列比对