細菌基因組完成圖真菌基因組完成圖微生物群落多樣性宏基因組測序服務全長轉錄組測序第三代測序服務非靶向代謝組學靶向代謝組學脂質組學離子組學脂肪酸檢測氨基酸檢測代謝組學服務定量蛋白質組服務雙向電泳服務修飾蛋白質組蛋白質芯片蛋白質譜鑒定蛋白互作檢測Western Blot蛋白質組學服務高通量測序數據分析蛋白質組學數據分析代謝組學數據分析芯片數據分析GO/Pathway富集分析相關性和聚類分析共表達網絡圖靶基因預測調控網絡圖蛋白相互作用網絡圖生物信息學服務CRISPR/Cas9載體構建穩定細胞系構建服務模式生物制備服務CRISPR/Cas9技術服務甲基化測序服務甲基化芯片服務甲基化驗證服務DNA甲基化服務lncRNA測序服務lncRNA芯片服務lncRNA定量PCR驗證lncRNA過表達服務lncRNA抑制服務lncRNA技術服務miRNA測序服務miRNA芯片服務miRNA定量PCR驗證miRNA過表達服務miRNA抑制服務miRNA靶基因驗證服務miRNA技術服務環狀RNA測序服務環狀RNA芯片服務環狀RNA定量PCR驗證環狀RNA過表達服務環狀RNA抑制服務環狀RNA技術服務轉錄組測序服務表達譜測序服務mRNA/lncRNA/環狀RNA 三合一芯片表達譜芯片服務熒光定量PCR驗證mRNA過表達服務mRNA抑制服務mRNA技術服務轉錄因子篩選服務抗體制備服務ChiP-Seq測序服務ChiP-qPCR技術服務EMSA技術服務luciferase 實驗服務轉錄因子技術服務mRNA定量PCR檢測miRNA定量PCR檢測lncRNA定量PCR檢測環狀RNA定量PCR檢測DNA拷貝數檢測相對定量PCR服務絕對定量PCR服務熒光定量PCR服務整體課題服務SNP分型檢測服務SSR/STR技術服務病毒包裝服務CRISPR/Cas9技術試劑miRNA功能研究試劑lncRNA功能研究試劑環狀RNA功能研究試劑mRNA功能研究試劑發表文獻樣品準備服務流程基金申請
絕對定量PCR服務
服務詳情

簡介

  熒光定量PCR對初始模板定量有兩種策略:相對定量法和絕對定量法。

  絕對定量是用已知濃度的標準品繪制標準曲線來推算未知樣品的量。將標準品稀釋至不同濃度,作為模板進行PCR反應。以標準品拷貝數的對數值為橫坐標,以測得的CT值為縱坐標,繪制標準曲線,對未知樣品進行定量時,根據未知樣品的CT值,即可在標準曲線中得到樣品的拷貝數。

標準曲線制作

1、絕對定量標準品

標準品可以是含有目的基因的線性化的質粒DNA,也可以是比擴增片段長的純化后的PCR產物,當然也可以是基因組DNA,甚至cDNA,但前提是所有的作為標準品的核酸都必須保證穩定。測定初始標準品的濃度,再將標準品依次進行10倍稀釋,達到5-8個不同標準品濃度。

2、定量PCR實驗:必須用與擴增目的基因相同的引物進行擴增,并且擴增效率相同。

3、制作標準曲線以標準品拷貝數的對數值為橫坐標,以測得的CT值為縱坐標,繪制標準曲線。如下圖:

標準曲線的繪制

數據分析

將待測樣品的CT值,對照標準曲線,即可得出樣品中目的基因的拷貝數,再對不同樣品進行比較分析。

應用領域

致病微生物的檢測、環境樣品的檢測、熒光定量PCR檢測mRNA、miRNA、lncRNA、環狀RNA的表達豐度以及不同樣品之間DNA拷貝數。